细胞的免疫荧光实验是一个基础的细胞实验，传统的方法是在培养板中放入预先处理好的盖玻片，待细胞贴壁后，使用镊子将盖玻片拿出再开始进行固定，染色等系列工作。为了简化这一工作，一系列底部适合直接成像的细胞耗材应运而生，如图：

日本的科研人员在研究细胞因子IL-33在Ca9-22细胞中免疫荧光染色试验时使用了一种通道载玻片。IL-33是一种在内皮细胞中常规表达的细胞因子，其参与调节了先天免疫细胞的Th2 细胞因子介导的免疫应答。研究人员想研究增强IL-33表达的牙周内皮细胞中牙周菌Porphyromonas gingivalis所发挥的作用。研究人员使用牙周菌P.gingivalis刺激Ca9-22细胞，再测试其中IL-33的表达。

 

Porphyromonas gingivalis Gingipain-Dependently Enhances IL-33 Production in Human Gingival Epithelial Cells

H. Tada, T. Matsuyama, T. Nishioka, M. Hagiwara, Y. Kiyoura, H. Shimauchi and K. Matsushita

PloS one, 2016, 10.1371/journal.pone.0152794

 

一）实验材料：

1）Ca9-22细胞

2）牙周菌P.gingivalis      50 μg/ml

3）多聚甲醛溶液            4%

4）BSA                    1%PBST溶液

5）藻红蛋白偶联的大鼠抗人IL-33抗体  （clone, 390412; R&D Systems）

6）DAPI

8）六通道载玻片          ibiTreat，德国ibidi公司，80606

图一：通道载玻片示意图。细胞的免疫荧光实验简化，并且节约试剂（单通道30μl），细胞分布及其均匀，成效效果好。

 

二）实验步骤

1）单通道铺入3×105 Ca9-22细胞，37℃,5%CO2环境中孵育过夜待细胞贴壁。

2）使用无细胞培养基，轻轻冲洗通道，移除未贴壁细胞（图二）。

图二：冲洗换液方法，蓝色代表新的无细胞培养基

3）用50 μg/ml牙周菌P.gingivalis，（MOI为0.13）加入通道中，刺激Ca9-22细胞4天

4）用4%的多聚甲醛固定15分钟

5）用1%BSA的PBST溶液封闭30分钟

6）使用0.5μg/ml的藻红蛋白偶联的大鼠抗人IL-33抗体4℃孵育1小时

7）DAPI孵育1分钟

8）用荧光显微镜观测数据。

 

三）实验结果

 

图三：牙周菌P.gingivalis增强牙周内皮细胞中IL-33的表达。用50 μg/ml牙周菌P.gingivalis，刺激Ca9-22细胞后使IL-33（红色）表达有显著的提高。细胞核（蓝色）